CHO HCP ELISA-Kit
In diesem Assay wird eine einstufige Immunosorbens-ELISA-Methode verwendet.Proben, die CHOK1 HCP enthalten, reagieren gleichzeitig mit dem HRP-markierten Ziegen-Anti-CHOK1-Antikörper und dem auf der ELISA-Platte beschichteten Anti-CHOK1-Antikörper und bilden schließlich einen Sandwich-Komplex aus Festphasen-Antikörper und HCP-markiertem Antikörper.Ungebundene Antigen-Antikörper können durch Waschen der ELISA-Platte entfernt werden.Für eine ausreichende Reaktion wird das TMB-Substrat in die Vertiefung gegeben.Die Farbentwicklung wird nach Zugabe der Stopplösung gestoppt und der OD- oder Absorptionswert der Reaktionslösung bei 450/650 nm mit einem Mikroplatten-Lesegerät abgelesen.Der OD-Wert oder Absorptionswert ist proportional zum HCP-Gehalt in der Lösung.Daraus lässt sich anhand der Standardkurve die HCP-Konzentration in der Lösung berechnen.
Anwendung
Dieses Kit wird zum quantitativen Nachweis des Gehalts an CHOK1-Wirtszellproteinrückständen in Proben verwendet.
CKomponenten
| Seriennummer | Komponente | Konzentration | Lagerbedingungen |
| 1 | CHOK1 HCP-Standard | 0,5 mg/ml | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20℃, vor Licht schützen |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, vor Licht schützen |
| 4 | 20 × PBST 0,05 % | NA | 2-8℃ |
| 5 | Stopplösung | NA | RT |
| 6 | Mikroplattenversiegeler | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Vorbeschichtete Platten mit hoher Adsorption | NA | 2-8℃ |
Benötigte Ausrüstung
| Verbrauchsmaterialien / Ausrüstung | Herstellung | Katalog |
| Mikroplatten-Reader | Molekulare Geräte | Spectra Max M5, M5e oder gleichwertig |
| Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355 oder gleichwertig |
| Vortexmixer | IKA | MS3 Digital oder gleichwertig |
Lagerung und Stabilität
1.Transport bei -25~-15°C.
2.Die Lagerbedingungen sind in Tabelle 1 aufgeführt.Komponenten 1-2 werden bei ≤–20°C gelagert, 5-6 werden bei RT gelagert,3、4、7、8 werden bei 2-8℃ gelagert;die Gültigkeitsdauer beträgt 12 Monate.
Produktparameter
1.Empfindlichkeit: 1 ng/ml
2.Erkennungsbereich: 3–100 ng/ml
3.Präzision: Intra-Assay-VK ≤ 10 %, Inter-Assay-VK ≤ 15 %
4.HCP-Abdeckung: >80 %
5.Spezifität: Dieses Kit ist universell einsetzbar, da es unabhängig vom Reinigungsprozess spezifisch mit CHOK1 HCP reagiert.
Reagenzvorbereitung
1.PBST 0,05 %
Nehmen Sie 15 ml 20×PBST 0,05 %, verdünnt in ddH2O, und auf 300 ml aufgefüllt.
2.1,0 % BSA
Nehmen Sie 1 g BSA aus der Flasche und verdünnen Sie es in 100 ml PBST 0,05 %, mischen Sie es gut, bis es vollständig aufgelöst ist, und lagern Sie es bei 2–8 °C.Der vorbereitete Verdünnungspuffer ist 7 Tage lang gültig.Es wird empfohlen, sich nach Bedarf vorzubereiten.
3.Nachweislösung 2 μg/ml
Nehmen Sie 48 μl 0,5 mg/ml Anti-CHO HCP-HRP und verdünnen Sie es in 11.952 μl 1 % BSA, um eine Endkonzentration von 2 μg/ml Nachweislösung zu erhalten.
4.Qualitätskontrolle und Vorbereitung von CHOK1-HCP-Standards
| Rohr NEIN. | Original | Konzentration | Volumen | 1 % BSA | volle Lautstärke | Finale |
| A | Standard | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1.000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tabelle: Vorbereitung der Qualitätskontrolle und Standards
Testverfahren
1.Bereiten Sie die Reagenzien wie oben unter „Reagenzienvorbereitung“ beschrieben vor.
2.Nehmen Sie 50 μl Standards, Proben und QCs (siehe Tabelle 3) in jede Vertiefung und geben Sie dann 100 μl Detektionslösung (2 μg/ml) hinzu.Decken Sie die Platte mit Versiegelung ab und legen Sie die ELISA-Platte auf den Thermomixer.2 Stunden lang bei 500 U/min und 25 ± 3 °C inkubieren.
3.Drehen Sie die Mikrotiterplatte im Spülbecken um und entsorgen Sie die Beschichtungslösung.Pipettieren Sie 300 μl PBST 0,05 % in jede Vertiefung, um die ELISA-Platte zu waschen, verwerfen Sie die Lösung und wiederholen Sie den Waschvorgang dreimal.Drehen Sie den Teller um, legen Sie ihn auf ein sauberes Papiertuch und tupfen Sie ihn trocken.
4.Geben Sie 100 μl TMB-Substrat (siehe Tabelle 1) in jede Vertiefung, verschließen Sie die ELISA-Platte und inkubieren Sie sie 15 Minuten lang im Dunkeln bei 25 ± 3 °C.
5.Pipettieren Sie 100 μl Stopplösung in jede Vertiefung.
6.Messen Sie die Absorption bei einer Wellenlänge von 450/650 nm mit einem Mikroplatten-Lesegerät.
7.Analysieren Sie Daten mit SoftMax oder gleichwertiger Software.Zeichnen Sie die Standardkurve mithilfe eines logistischen Regressionsmodells mit vier Parametern.
Beispiel für eine Standardkurve
HINWEIS: Wenn die HCP-Konzentration in der Probe die Obergrenze der Standardkurve überschreitet, muss sie vor dem Test ordnungsgemäß mit Verdünnungspuffer verdünnt werden.
ANMERKUNGEN
Die Stopplösung besteht aus 2M Schwefelsäure, bitte vorsichtig handhaben, um Spritzer zu vermeiden!
