DNase I
DNase I (Desoxyribonuklease I) ist eine Endodeoxyribonuklease, die einzel- oder doppelsträngige DNA verdauen kann.Es erkennt und spaltet Phosphodiesterbindungen, um Monodesoxynukleotide oder einzel- oder doppelsträngige Oligodesoxynukleotide mit Phosphatgruppen am 5′-Terminus und Hydroxylgruppen am 3′-Terminal zu erzeugen.Die Aktivität von DNase I hängt von Ca2+ ab und kann durch zweiwertige Metallionen wie Mn2+ und Zn2+ aktiviert werden.5 mM Ca2+ schützt das Enzym vor Hydrolyse.In Gegenwart von Mg2+ könnte das Enzym jede Stelle auf jedem DNA-Strang zufällig erkennen und spalten.In Gegenwart von Mn2+ können die Doppelstränge der DNA gleichzeitig erkannt und an nahezu derselben Stelle gespalten werden, um DNA-Fragmente mit flachem Ende oder DNA-Fragmente mit klebrigem Ende mit 1–2 hervorstehenden Nukleotiden zu bilden.
Produkteigenschaft
Rinderpankreas-DNase I wurde in einem Hefe-Expressionssystem exprimiert und gereinigt.
CKomponenten
| Komponente | Volumen | |||
| 0,1 KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase-frei | 20μL | 200μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I-Puffer | 1 ml | 1 ml | 5× 1 ml | 5× 10 ml |
Transport und Lagerung
1. Lagerstabilität: – 15℃~-25℃ für die Lagerung;
2. Transportstabilität: Transport unter Eisbeuteln;
3. Geliefert in: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50 % Glycerin, pH 7,6 bei 25℃.
Einheitendefinition
Eine Einheit ist als die Enzymmenge definiert, die 1 µg pBR322-DNA in 10 Minuten bei 37 °C vollständig abbaut.
Qualitätskontrolle
RNase:5 U DNase I mit 1,6 μg MS2-RNA für 4 Stunden bei 37 °C führen zu keinem Abbau, wie durch Agarosegelelektrophorese bestimmt.
Bakterien Endotoxin:LAL-Test, gemäß der Ausgabe 2020 des Chinesischen Arzneibuchs IV, Gelgrenztestmethode, allgemeine Regel (1143).Der Gehalt an bakteriellem Endotoxin sollte ≤10 EU/mg betragen.
Gebrauchsanweisung
1. Bereiten Sie die Reaktionslösung im RNase-freien Röhrchen gemäß den unten aufgeführten Anteilen vor:
| Komponente | Volumen |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I-Puffer | 1 μL |
| DNase I, RNase-frei (5U/μL) | 1 U pro μg RNA |
| ddH2O | Bis zu 10 μL |
2,37 ℃ für 15 Minuten;
3. Fügen Sie den Terminationspuffer hinzu, um die Reaktion zu stoppen, und erhitzen Sie es 10 Minuten lang auf 65 °C, um DNase I zu inaktivieren. Die Probe kann direkt für das nächste Transkriptionsexperiment verwendet werden.
Anmerkungen
1.Verwenden Sie 1U DNase I pro μg RNA oder 1U DNase I für weniger als 1μg RNA.
2.EDTA sollte bis zu einer Endkonzentration von 5 mM hinzugefügt werden, um die RNA vor dem Abbau während der Enzyminaktivierung zu schützen.
