Alkalische Phosphatase (ALP)

Alkalische Phosphatase stammt von einem rekombinanten E. coli-Stamm, der das TAB5-Gen trägt.Das Enzym katalysiert die Dephosphorylierung der 5´- und 3´-Enden von DNA- und RNA-Phosphomonoestern.Außerdem hydrolysiert es Ribose sowie Desoxyribonukleosidtriphosphate (NTPs und dNTPs).TAB5 Alkaline Phosphatase wirkt auf 5´ vorstehende, 5´ vertiefte und stumpfe Enden.Die Phosphatase kann in vielen molekularbiologischen Anwendungen verwendet werden, wie z. B. Klonierung oder Markierung von Sondenenden, um die phosphorylierten Enden von DNA oder RNA zu entfernen.In Klonierungsexperimenten verhindert die Dephosphorylierung die Selbstligation der linearisierten Plasmid-DNA.Es kann auch nicht eingebaute dNTPs in PCR-Reaktionen abbauen, um eine Matrize für die DNA-Sequenzierung herzustellen.Durch 5-minütiges Erhitzen auf 70°C wird das Enzym vollständig und irreversibel inaktiviert, wodurch die Entfernung der Phosphatase vor der Ligation oder Endmarkierung unnötig wird.