Maus-Genotypisierungskit

Kat.-Nr.: HCR2021A

Bei diesem Produkt handelt es sich um ein Kit zur schnellen Identifizierung von Maus-Genotypen, einschließlich DNA-Rohextraktion und PCR-Amplifikationssystem.Das Produkt kann für die PCR-Amplifikation direkt aus Mausschwanz, Ohr, Zehen und anderen Geweben nach einfacher Spaltung durch Lysepuffer und Proteinase k verwendet werden.Kein Aufschluss über Nacht, keine Phenol-Chloroform-Extraktion oder Säulenreinigung, was einfach ist und den Zeitaufwand für Experimente verkürzt.Das Produkt eignet sich für die Amplifikation von Zielfragmenten bis zu 2 kb und Multiplex-PCR-Reaktionen mit bis zu 3 Primerpaaren.Der 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix enthält gentechnisch veränderte DNA-Polymerase, Mg²⁺, dNTPs und ein optimiertes Puffersystem, um eine hohe Amplifikationseffizienz und Inhibitortoleranz zu gewährleisten, sodass PCR-Reaktionen durch Zugabe von Template und Primern und Rehydratisierung des Produkts auf 1× durchgeführt werden können.Das mit diesem Produkt amplifizierte PCR-Produkt weist eine prominente „A“-Base am 3‘-Ende auf und kann nach der Reinigung direkt für die TA-Klonierung verwendet werden.

Komponenten

Lagerbedingungen

Produkte sollten 2 Jahre lang bei -25 bis -15 °C gelagert werden.Nach dem Auftauen kann der Lysepuffer für eine kurzfristige Mehrfachverwendung bei 2 bis 8 °C gelagert und bei der Verwendung gut gemischt werden.

Anwendung

Dieses Produkt eignet sich für die Maus-Knockout-Analyse, den transgenen Nachweis, die Genotypisierung usw.

Merkmale

1.Einfache Bedienung: keine Extraktion genomischer DNA erforderlich;

2.Breite Anwendung: Geeignet für die direkte Amplifikation verschiedener Mausgewebe.

Anweisungen

1.Freisetzung genomischer DNA

1) Vorbereitung des Lysats

Gewebelysat wird entsprechend der Anzahl der zu lysierenden Mausproben vorbereitet (Gewebelysat sollte entsprechend der Dosierung vor Ort zubereitet und vor der Verwendung gründlich gemischt werden), und der Anteil der für eine einzelne Probe erforderlichen Reagenzien ist wie folgt:

2) Probenvorbereitung und Lyse

Empfohlene Verwendung von Gewebe

Nehmen Sie eine angemessene Menge Mausgewebeproben in saubere Zentrifugenröhrchen, geben Sie 200 μl frisches Gewebelysat in jedes Zentrifugenröhrchen, mischen und schütteln Sie es, inkubieren Sie es dann 30 Minuten lang bei 55 °C und erhitzen Sie es dann 3 Minuten lang auf 98 °C.

3) Zentrifugation

Schütteln Sie das Lysat gut und zentrifugieren Sie es 5 Minuten lang bei 12.000 U/min.Der Überstand kann als Vorlage für die PCR-Amplifikation verwendet werden.Wenn die Vorlage zur Aufbewahrung benötigt wird, überführen Sie den Überstand in ein anderes steriles Zentrifugenröhrchen und lagern Sie ihn 2 Wochen lang bei -20 °C.

2.PCR-Amplifikation

Nehmen Sie den 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix von -20 °C, tauen Sie ihn auf Eis auf, mischen Sie ihn auf den Kopf und bereiten Sie das PCR-Reaktionssystem gemäß der folgenden Tabelle vor (auf Eis betreiben):

Notiz:

a) Die hinzugefügte Menge sollte 1/10 des Systems nicht überschreiten. Wenn zu viel hinzugefügt wird, kann die PCR-Amplifikation gehemmt werden.

Empfohlene PCR-Bedingungen

Notiz:

a) Glühtemperatur: In Bezug auf den Tm-Wert des Primers wird empfohlen, die Glühtemperatur auf den kleineren Tm-Wert des Primers +3~5℃ einzustellen.

Häufige Probleme und Lösungen

1.Keine gezielten Streifen

1) Übermäßiges Lyseprodukt.Wählen Sie die am besten geeignete Menge an Vorlage, normalerweise nicht mehr als 1/10 des Systems;

2) Zu große Stichprobengröße.Verdünnen Sie das Lysat zehnmal und verstärken Sie es dann oder reduzieren Sie die Probengröße und lysieren Sie es erneut.

3) Gewebeproben sind nicht frisch.Es wird empfohlen, frische Gewebeproben zu verwenden;

4) Schlechte Primerqualität.Verwenden Sie genomische DNA zur Amplifikation, um die Primerqualität zu überprüfen und das Primerdesign zu optimieren.

2.Unspezifische Verstärkung

1) Die Glühtemperatur ist zu niedrig und die Zyklenzahl zu hoch.Erhöhen Sie die Glühtemperatur und verringern Sie die Anzahl der Zyklen.

2) Die Template-Konzentration ist zu hoch.Reduzieren Sie die Template-Menge oder verdünnen Sie das Template nach der Amplifikation um das Zehnfache;

3) Schlechte Primerspezifität.Optimieren Sie das Primer-Design.

Anmerkungen

1.Um eine Kreuzkontamination zwischen Proben zu vermeiden, sollten mehrere Probenahmewerkzeuge vorbereitet werden, und die Oberfläche der Werkzeuge kann nach jeder Probenahme mit 2 %iger Natriumhypochloritlösung oder Nukleinsäurereiniger gereinigt werden, wenn eine wiederholte Verwendung erforderlich ist.

2.Es wird empfohlen, frisches Mausgewebe zu verwenden und das Probenvolumen sollte nicht zu groß sein, um die Amplifikationsergebnisse nicht zu beeinträchtigen.

3.Der Lysepuffer sollte häufiges Einfrieren und Auftauen vermeiden und kann zur kurzfristigen Mehrfachverwendung bei 2 bis 8 °C gelagert werden.Bei Lagerung bei niedrigen Temperaturen kann es zu Ausfällungen kommen, die vor Gebrauch vollständig aufgelöst werden müssen.

4.Der PCR-Mix sollte häufiges Einfrieren und Auftauen vermeiden und kann für eine kurzfristige wiederholte Verwendung bei 4 °C gelagert werden.

5.Dieses Produkt dient nur der wissenschaftlichen experimentellen Forschung und sollte nicht für die klinische Diagnose oder Behandlung verwendet werden.