Virales DNA/RNA-Extraktionskit
Dieses Kit eignet sich für die schnelle Extraktion hochreiner viraler DNA/RNA aus Proben wie Nasopharynxabstrichen, Umweltabstrichen, Zellkulturüberständen und Gewebehomogenatüberständen.Das Kit basiert auf der Silica-Membran-Reinigungstechnologie, die die Verwendung organischer Phenol-/Chloroform-Lösungsmittel oder die zeitaufwändige Alkoholfällung zur Extraktion hochwertiger viraler DNA/RNA überflüssig macht.Die erhaltenen Nukleinsäuren sind frei von Verunreinigungen und können in nachgelagerten Experimenten wie Reverse Transkription, PCR, RT-PCR, Echtzeit-PCR, Next-Generation-Sequenzierung (NGS) und Northern Blot verwendet werden.
Lagerbedingungen
Bei 15 bis 25 °C lagern und bei Raumtemperatur transportieren
Komponenten
| Komponenten | 100RXNS |
| Puffer VL | 50 ml |
| Puffer RW | 120 ml |
| RNase-freies ddH2 O | 6 ml |
| FastPure RNA-Säulen | 100 |
| Sammelröhrchen (2 ml) | 100 |
| RNase-freie Sammelröhrchen (1,5 ml) | 100 |
Puffer VL:Sorgen Sie für eine Umgebung für Lyse und Bindung.
Puffer RW:Entfernen Sie restliche Proteine und andere Verunreinigungen.
RNase-freies ddH2O:Eluieren Sie DNA/RNA von der Membran in der Spin-Säule.
FastPure RNA-Säulen:Adsorbieren Sie gezielt DNA/RNA.
Sammelröhrchen 2 ml:Filtrat sammeln.
RNase-freie Sammelröhrchen 1,5 ml:Sammeln Sie DNA/RNA.
Anwendungen
Nasopharynxabstriche, Umweltabstriche, Zellkulturüberstände und Gewebehomogenatüberstände.
Selbst vorbereitete Materials
RNase-freie Pipettenspitzen, 1,5 ml RNase-freie Zentrifugenröhrchen, Zentrifuge, Vortexmischer und Pipetten.
Experimentierprozess
Führen Sie alle folgenden Schritte in einer Biosicherheitswerkbank durch.
1. 200 μl der Probe in ein RNase-freies Zentrifugenröhrchen geben (bei unzureichender Probe mit PBS oder 0,9 % NaCl auffüllen), 500 μl Puffer VL hinzufügen, durch 15–30 Sekunden langes Vortexen gut mischen und zentrifugieren kurz, um die Mischung am Boden des Röhrchens aufzufangen.
2. Geben Sie die FastPure RNA-Säulen in ein 2-ml-Sammelröhrchen.Übertragen Sie die Mischung aus Schritt 1 auf FastPure RNA-Säulen, zentrifugieren Sie sie 1 Minute lang bei 12.000 U/min (13.400 × g) und verwerfen Sie das Filtrat.
3. 600 μl Puffer RW zu den FastPure RNA-Säulen hinzufügen, 30 Sekunden lang bei 12.000 U/min (13.400 × g) zentrifugieren und das Filtrat verwerfen.
4. Wiederholen Sie Schritt 3.
5. Zentrifugieren Sie die leere Säule 2 Minuten lang bei 12.000 U/min (13.400 × g).
6. Übertragen Sie die FastPure RNA-Säulen vorsichtig in ein neues 1,5-ml-RNase-freies Sammelröhrchen (im Kit enthalten) und geben Sie 30 – 50 μl RNase-freies ddH2O in die Mitte der Membran, ohne die Säule zu berühren.1 Minute bei Raumtemperatur stehen lassen und 1 Minute bei 12.000 U/min (13.400 × g) zentrifugieren.
7. Entsorgen Sie die FastPure RNA-Säulen.Die DNA/RNA kann direkt für nachfolgende Tests verwendet oder für kurze Zeit bei -30 bis -15 °C oder für längere Zeit bei -85 bis -65 °C gelagert werden.
Anmerkungen
Nur für Forschungszwecke.Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren geeignet.
1. Proben vorher auf Raumtemperatur äquilibrieren.
2. Viren sind hochansteckend.Bitte stellen Sie sicher, dass vor dem Experiment alle notwendigen Sicherheitsvorkehrungen getroffen werden.
3. Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren und Auftauen der Probe, da dies zu einem Abbau oder einer verringerten Ausbeute der extrahierten viralen DNA/RNA führen kann.
4. Zur selbst vorbereiteten Ausrüstung gehören RNase-freie Pipettenspitzen, 1,5 ml RNase-freie Zentrifugenröhrchen, Zentrifuge, Vortex-Mischer und Pipetten.
5. Tragen Sie bei der Verwendung des Kits einen Laborkittel, Einweg-Latexhandschuhe und eine Einwegmaske und verwenden Sie RNase-freie Verbrauchsmaterialien, um das Risiko einer RNase-Kontamination zu minimieren.
6. Führen Sie alle Schritte bei Raumtemperatur durch, sofern nicht anders angegeben.
Mechanismus und Arbeitsablauf
