Multiplex-qPCR-Sonden-Vormischung
Kat.-Nr.: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) ist eine Vorlösung für die 2-fache quantitative Echtzeit-PCR-Amplifikation, die sich durch hohe Empfindlichkeit und Spezifität auszeichnet, blau gefärbt ist und den Effekt einer Probenzugabe hat.Bei diesem Produkt handelt es sich um ein vorgemischtes 2×-Mix-Reagenz, das bis zu vier fluoreszierende quantitative PCR-Reaktionen in einer einzigen Reaktionsvertiefung ermöglicht.Dieses Produkt enthält die gentechnisch veränderte Antikörpermethode zum Heißstart des Taq-Enzyms, wodurch die Empfindlichkeit und Spezifität der Amplifikation erheblich verbessert wird.Gleichzeitig hat dieses Produkt den Multireaktionspuffer tiefgreifend optimiert, was die Amplifikationseffizienz der Reaktion verbessern und die effektive Amplifikation von Templaten mit niedriger Konzentration fördern kann.Dieses Produkt kann zur Genotypisierung und quantitativen Multiplex-Analyse verwendet werden.
Spezifikation
| Heißer Start | Eingebauter Heißstart |
| Erkennungsmethode | Primer-Sonden-Erkennung |
| PCR-Methode | qPCR |
| Polymerase | Taq-DNA-Polymerase |
| Art der Probe | DNA |
Lagerbedingungen
Das Produkt wird mit Trockeneis geliefert und kann bei -25 bis -15 °C 2 Jahre lang gelagert werden.
Anweisungen
1. ReaktionSystem
| Komponenten | Volumen (μL) | Endgültige Konzentration |
| 2× TaqMan Multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Primermischung (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Sondenmischung (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox-Referenzfarbstoff | 0,5 | 1× |
| Template-DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | bis zu 25 | - |
Anmerkungen:Vor Gebrauch gründlich mischen, um übermäßige Blasenbildung durch kräftiges Schütteln zu vermeiden.
A.Primerkonzentration: Primer Mix enthält mehrere Primerpaare, normalerweise hat jeder Primer eine Endkonzentration von 0,2 μmol/L und kann je nach Bedarf auch zwischen 0,1 und 0,5 μmol/L angepasst werden.
B.Sondenkonzentration: Probe Mix enthält mehrere Sonden mit unterschiedlichen Fluoreszenzsignalen, und die Konzentration jeder Sonde kann je nach Situation zwischen 50 und 250 nmol/L angepasst werden.
1.Rox-Farbstoff-Referenz: Wird auf Echtzeit-PCR-Amplifikationsgeräten wie Applied Biosystems verwendet, um den Fehler des zwischen Wells erzeugten Fluoreszenzsignals zu korrigieren.Dieses Produkt enthält keine Rox-Farbstoffreferenz.Bei Bedarf wird Cas#10200 empfohlen.
2.Template-Verdünnung: qPCR ist hochempfindlich und es wird empfohlen, das Template vor der Verwendung zu verdünnen.Wenn es sich bei der Vorlage um eine cDNA-Stammlösung handelt, sollte das Vorlagenvolumen 1/10 des Gesamtvolumens nicht überschreiten.
3.Reaktionssystem: 25 μl, 30 μl oder 50 μl werden empfohlen, um die Wirksamkeit und Wiederholbarkeit der Zielgenamplifikation sicherzustellen.
4.Systemvorbereitung: Bitte bereiten Sie es in der Super-Clean-Bank vor und verwenden Sie die Spitzen und Reaktionsgefäße ohne Nukleaserückstände;Es wird empfohlen, die Spitzen mit Filterkartuschen zu verwenden.Vermeiden Sie Kreuzkontaminationen und Aerosolkontaminationen.
2.Reaktionsprogramm
| Zyklusschritt | Temp. | Zeit | Fahrräder |
| Erstdenaturierung | 95 ℃ | 5 Minuten | 1 |
| Denaturierung | 95 ℃ | 15 Sek | 45 |
| Glühen/Verlängern | 60 ℃ | 30 Sekunden |
Anmerkungen:
1.Glühen/Verlängern: Die Temperatur und die Zeit können entsprechend dem geplanten Primer-Tm-Wert entsprechend angepasst werden.
2.Fluoreszenzsignalerfassung: Die für verschiedene qPCR-Nachweisgeräte erforderliche Zeit für die Fluoreszenzsignalerfassung ist unterschiedlich. Bitte stellen Sie sie entsprechend der Mindestzeit ein.Die Zeit einiger gängiger Instrumente wird wie folgt eingestellt:
20 Sek.: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Schnell
31 Sek.: Applied Biosystems 7300
32 Sek.: Applied Biosystems 7500
Anmerkungen
Bitte tragen Sie die erforderliche PSA, wie Laborkittel und Handschuhe, um Ihre Gesundheit und Sicherheit zu gewährleisten!
