Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Kat.-Nr.: HCB5145A
Das Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) ist ein quantitatives Multiplex-PCR-Kit, das auf RNA als Vorlage basiert.Im Verlauf des Experiments wurden Reverse Transkription und quantitative PCR im selben Röhrchen durchgeführt, was den Versuchsablauf vereinfachte und das Risiko einer Kontamination verringerte.In diesem Kit wurde der erste cDNA-Strang effizient durch hitzebeständige Reverse Transkriptase synthetisiert und durch HotStart Tag DNA Polymerase quantitativ amplifiziert.Das Kit enthält hauptsächlich optimierten MP-Puffer, Enzymmischung usw. Die Pufferlösung enthält bereits Mg2+und dNTP.Darüber hinaus werden Faktoren hinzugefügt, die die unspezifische PCR-Amplifikation wirksam hemmen und die Amplifikationseffizienz mehrerer qPCR-Reaktionen verbessern können, wodurch die Amplifikationseffizienz sichergestellt und bis zu mehrere Amplifikationsreaktionen durchgeführt werden können.Um das Risiko einer Aerosolkontamination wirksam zu verhindern, wurde das dUTP/UDG-System hinzugefügt.
Komponenten
1. Puffer
2. Enzymmischung
Spezifikation
| Heißer Start | Eingebauter Heißstart |
| Erkennungsmethode | Primer-Sonden-Erkennung |
| PCR-Methode | Einstufige RT-qPCR |
| Polymerase | Taq-DNA-Polymerase |
| Art der Probe | DNA |
Lagerbedingungen
Das Produkt wird mit Trockeneis geliefert und kann 1 Jahr lang bei -25 bis -15 °C gelagert werden.Es sollte häufig vermieden werdenEinfrieren-Tauen.Es wird empfohlen, separat zu speichern.
Anweisungen
1.Reaktion System
| Komponenten | Volumen (μL) | Endgültige Konzentration |
| 2 × MP-Puffer | 12.5 | 1× |
| Enzymmischung | 1 | - |
| Primer-/Sondenmischung (2,5 μM) | 3 | 0,3μM |
| Template-RNA | 1-10 | - |
| RNase-freies H2O | bis 25 | - |
Anmerkungen:
Vor Gebrauch unbedingt gut vermischen, übermäßige Blasenbildung durch heftige Vibrationen vermeiden.
A.Primerkonzentration: Primermischung einschließlich Multiplex-Primer, je nach Situation kann die optimale Primerkonzentration zwischen 0,1 und 1,0 μM liegen.
B.Sondenkonzentration: Sondenmischung einschließlich Multiplex-Sondenmarkierung mit unterschiedlicher Fluoreszenzgruppe, je nach Situation kann die optimale Sondenkonzentration zwischen 0,05 und 0,5 μM liegen.
C.Template-Verdünnung: qPCR ist hochempfindlich und es wird empfohlen, das Template zu verdünnen.Der Kontroll-Ct-Wert liegt zwischen 20 und 35.
D.Systemvorbereitung: Bitte im ultrareinen Arbeitstisch vorbereiten, Pipette und Reaktionsgefäß frei von Nukleaserückständen;Es wird empfohlen, den Pistolenkopf mit Filterelement zu verwenden.Vermeiden Sie Kreuzkontaminationen und Aerosolkontaminationen.
2. Optimiertes RadfahrenProtokoll
| Zyklus Schritt | Temp. | Zeit | Fahrräder |
| Reverse Transkription | 50℃A | 20 Min | 1 |
| Erstdenaturierung | 95℃ | 5 Minuten | 1 |
| Verstärkungsreaktion | 95℃ | 15 Sek |
40-45 |
| 60℃ b | 30 Sekunden c |
Anmerkungen:
A.Umgekehrte Transkription: Die Temperatur kann zwischen 42 °C und 50 °C liegen.
B.Amplifikationsreaktion: Die Temperatur wird entsprechend dem Tm-Wert der entworfenen Primer angepasst.
C.Fluoreszenzsignalerfassung: Bitte stellen Sie den experimentellen Ablauf gemäß den Anforderungen des Gerätehandbuchs ein.
Anmerkungen
Bitte tragen Sie die erforderliche PSA, wie Laborkittel und Handschuhe, um Ihre Gesundheit und Sicherheit zu gewährleisten.
