Rnase A
Ribonuklease A (RNaseA) ist ein einzelsträngiges Polypeptid mit 4 Disulfidbindungen und einem Molekulargewicht von etwa 13,7 kDa.RNase A ist eine Endoribonuklease, die einzelsträngige RNA spezifisch an C- und U-Resten abbaut.Konkret erkennt die Spaltung die Phosphodiesterbindung, die durch die 5′-Ribose eines Nukleotids und die Phosphatgruppe an der 3′-Ribose des benachbarten Pyrimidinnukleotids gebildet wird, so dass die 2,3′-zyklischen Phosphate zu den entsprechenden 3 hydrolysiert werden ′Nukleosidphosphate (z. B. pG-pG-pC-pA-pG wird durch RNase A gespalten, um pG-pG-pCp und A-PG zu erzeugen).RNase A ist am aktivsten bei der Spaltung einzelsträngiger RNA.Die empfohlene Arbeitskonzentration beträgt 1–100 μG/ml und ist mit verschiedenen Reaktionssystemen kompatibel.Eine niedrige Salzkonzentration (0–100 mM NaCl) kann zum Schneiden von einzelsträngiger RNA, doppelsträngiger RNA und durch RNA-DNA-Hybridisierung gebildeten RNA-Ketten verwendet werden.Bei einer hohen Salzkonzentration (≥0,3 M) spaltet RNase A jedoch nur spezifisch einzelsträngige RNA.
RNase A wird am häufigsten zur Entfernung von RNA während der Vorbereitung von Plasmid-DNA oder genomischer DNA verwendet. Ob DNase während des Vorbereitungsprozesses aktiv ist oder nicht, kann die Reaktion leicht beeinflussen.Die traditionelle Methode des Kochens in einem Wasserbad kann zur Inaktivierung der DNase-Aktivität verwendet werden.Dieses Produkt enthält keine DNase und Protease und erfordert vor der Verwendung keine Wärmebehandlung.Darüber hinaus kann dieses Produkt auch in molekularbiologischen Experimenten wie der RNase-Schutzanalyse und der RNA-Sequenzanalyse eingesetzt werden.
Lagerbedingungen
Das Produkt kann bei -25 bis 15 °C gelagert werden und ist 2 Jahre lang gültig.
Anweisungen
Dies ist eine der gängigen Methoden zur Vorbereitung der RNase A-Aufbewahrungslösung.Es kann auch zubereitet werdenandere Methoden entsprechend den traditionellen Methoden im Labor oder Referenzliteratur (wie z. Bdirektes Auflösen in 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 oder Tris-NaCl-Lösung)
1. Verwenden Sie 10 mM Natriumacetat (pH 5,2), um 10 mg/ml RNase A-Aufbewahrungslösung herzustellen
2. Erhitzen auf 100 °C für 15 Minuten
3. Auf Raumtemperatur abkühlen lassen, 1/10 Volumen 1 M Tris-HCl (pH 7,4) hinzufügen und den pH-Wert auf 7,4 einstellen (zBeispiel: 500 ml 10 g/ml RNase-Aufbewahrungslösung (1M Tris-HCL, PH7,4) hinzufügen.
4. Unterverpackt bei -20 °C für die Tiefkühllagerung, die bis zu 2 Jahre stabil sein kann.
[Anmerkungen]: Beim Kochen der RNaseA-Lösung unter neutralen Bedingungen bildet sich ein RNase-Niederschlag;Wenn Sie es bei einem niedrigeren pH-Wert kochen, kann es zu Ausfällungen kommen, die durch das Vorhandensein von Proteinverunreinigungen verursacht werden können.Wenn nach dem Kochen Sedimente gefunden werden, können Verunreinigungen durch Hochgeschwindigkeitszentrifugation (13.000 U/min) entfernt und dann zur Gefrierlagerung verpackt werden.
Produktinformation
| Synonyme | Ribonuklease I;Pankreas-Ribonuklease;Ribonuklease 3'-Pyrimidnooligonukleotidhydrolase;Rnase A;Endoribonulcease I |
| CAS-Nr. | 9001-99-4 |
| Aussehen | Weißes lyophilisiertes Pulver |
| Molekulargewicht | ~ 13,7kDa (Aminosäuresequenz) |
| PH Wert | 7,6 (Aktivitätsbereich 6–10) |
| Geeignete Temperatur | 60℃ (Aktivitätsbereich 15-70℃) |
| Aktivierungsmittel | Na2+.K+ |
| Inhibitor | RNase-Inhibitor |
| Inaktivierungsmethode | Kann durch Erhitzen nicht inaktiviert werden. Es wird empfohlen, eine Zentrifugensäule zu verwenden |
| Herkunft | Rinder |
| Löslichkeit | Löslich in Wasser (10 mg/ml) |
| Trockenverlust | ≤5,0 % |
| Enzymaktivität | ≥60 Kunitz-Einheiten/mg |
| Isoelektrischer Punkt | 9.6 |
Anmerkungen
Zu Ihrer Sicherheit und Gesundheit tragen Sie bei der Bedienung bitte Laborkittel und Einweghandschuhe.
