RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Dieses Produkt enthält Reaktionspuffer, RT-Enzym-Mix (Bst-DNA-Polymerase und hitzebeständige Reverse Transkriptase), lyophilisierte Schutzmittel und chromogene Farbstoffkomponenten.Zur Verwendung verwenden Sie einfach Puffer, das Reaktionsenzym und der Primer werden gemischt und der Vorlage hinzugefügt.Die Zugabe von lyophilisiertem Schutzmittel kann direkt erfolgen.Es wurde an einen Lyophilisator angeschlossen und lyophilisiert, und bei der Verwendung wurden nur die Primer und Templates hinzugefügt.Dieses Kit ermöglicht eine schnelle und klare visuelle Erkennung der Amplifikation. Die negative Reaktion wird in Rot und die positive Reaktion durch einen Wechsel zu Gelb angezeigt.
Komponente
| Komponente | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Schleifenvermittelter Amplifikationspuffer (mit Farbstoff) | 0,96 ml | 4,80 ml×2 | 9,60 ml×10 |
| RT-Enzymmischung | 270 μL | 2,70 ml | 2,70 ml×10 |
| Lyophilisiertes Schutzmittel | 0,96 ml×2 | 9,60 ml×2 | 9,60 ml×20 |
Anwendungen
Für die isotherme Amplifikation von DNA oder RNA.
Lagerbedingungen
Transportiert mit Trockeneis, gelagert bei -25 bis -15 °C.Vermeiden Sie häufiges Einfrieren und Auftauen, das Produkt ist 12 Monate haltbar.
Protokoll
1.Tauen Sie den zu verwendenden Reaktionspuffer bei Raumtemperatur auf.Um die Röhrchen gründlich zu vermischen, kurz vortexen oder mehrmals umdrehen, dann zentrifugieren, um die Flüssigkeit am Boden des Röhrchens zu sammeln.
2.Vorbereitung des Reaktionssystems.Dieses Reagenz kann in zwei Reaktionssystemen hergestellt werden, einem flüssigen Reaktionsgemisch und einem lyophilisierten Systemgemisch.
1) Bereiten Sie eine flüssige Reaktionsmischung vor
| Komponente | Volumen |
| Schleifenvermittelter Amplifikationspuffer (mit Farbstoff) | 10 μL |
| RT-Enzymmischung | 2,8 μL |
| 10 × Grundierungsmischunga | 5 μL |
| Vorlagen DNA/RNA b | × μL |
| Nukleasefreies Wasser | Bis zu 50 μL |
2) Lyophilisierungssystemmischung
① Bereiten Sie eine lyophilisierte Mischung vor
| Komponente | Volumen |
| Schleifenvermittelter Amplifikationspuffer (mit Farbstoff) | 10 μL |
| Lyophilisiertes Schutzmittel | 20 μL |
| RT-Enzymmischung | 2,8 μL |
| Nukleasefreies Wasser | Bis zu 50 μL |
② Lyophilisierung: Die vorbereitete Mischung wurde in einem 50-μL-System lyophilisiert
③ Reaktionsmischung vorbereiten
| Komponente | Volumen |
| Lyophilisierte Mischung | 1 Stück |
| 10 × Grundierungsmischunga | 5 μL |
| Vorlagen DNA/RNA b | × μL |
| Nukleasefreies Wasser | Bis zu 50 μL |
Anmerkungen:
1) a.10×Primer-Mix: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (wasserlöslich) wird für Nukleinsäure-Templates empfohlen.
1.30–45 Minuten lang bei 65 °C inkubieren. Je nach Farbänderungsreaktionszeit kann die Zeit entsprechend verlängert werden.
2.Mit bloßem Auge war Gelb positiv und Rot negativ.
Anmerkungen
1.Am Boden des Pufferröhrchens kann sich Salz bilden. Mischen Sie es kurz kurz oder drehen Sie die Röhrchen mehrmals um, um es bei Raumtemperatur gründlich zu vermischen.
2.Die Reaktionstemperatur kann je nach Zustand der Primer zwischen 62 °C und 68 °C optimiert werden.
3.Die verpackten Reagenzien sollten nicht über längere Zeit der Luft ausgesetzt werden.
4.Die rote und gelbe Verfärbungsreaktion hängt von der pH-Änderung des Reaktionssystems ab. Bitte verwenden Sie nicht die Tris-Nukleinsäure-Aufbewahrungslösung, es wird empfohlen, ddH zu verwenden2O gespeicherte Nukleinsäure;
5.Das Experiment sollte standardisiert sein, einschließlich der Vorbereitung des Reaktionssystems, der Lyophilisierung sowie des Probenverarbeitungs- und Probenzugabeprozesses;
6.Um eine Kontamination zu vermeiden, wird empfohlen, das Reaktionssystem in einer ultrareinen Bank vorzubereiten, in anderen Fällen fügen Sie Vorlagen dem Abzug des Raums hinzu, um falsch positive Interferenzen zu vermeiden.
