Ultra-Nuklease
UltraNuclease ist eine gentechnisch veränderte Endonuklease aus Serratia marcescens, die in der Lage ist, DNA oder RNA, entweder doppel- oder einzelsträngig, linear oder zirkulär, unter einer Vielzahl von Bedingungen abzubauen und Nukleinsäuren vollständig in 5'-Monophosphat-Oligonukleotide mit einer Länge von 3–5 Basen abzubauen .Nach der gentechnischen Modifikation wurde das Produkt in Escherichia coli (E. coli) fermentiert, exprimiert und gereinigt, was die Viskosität von Zellüberstand und Zelllysat in der wissenschaftlichen Forschung verringert, aber auch die Reinigungseffizienz und die Funktionsforschung von Protein verbessert.Es kann auch in der Gentherapie, Virusreinigung, Impfstoffproduktion, Protein- und Polysaccharid-Pharmaindustrie als Reagenz zur Entfernung von Wirtsrückständen und Nukleinsäuren eingesetzt werden.
Produktmerkmale
| CAS-Nr. | 9025-65-4 |
| EG-Nr. | |
| Molekulargewicht | 30kDa |
| Isoelektrischer Punkt | 6,85 |
| Proteinreinheit | ≥99 % (SDS-PAGE und SEC-HPLC) |
| Spezielle Aktivität | ≥1.1×106U/mg |
| Optimale Temperatur | 37°C |
| Optimaler pH-Wert | 8,0 |
| Proteaseaktivität | Negativ |
| Keimbelastung | <10 KBE/100.000 U |
| Restliches Wirtszellprotein | ≤10 ppm |
| Schwermetall | ≤10 ppm |
| Bakterielles Endotoxin | <0,25EU/1000U |
| Speicherpuffer | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50 % Glycerin |
Lagerbedingungen
≤0°C Transport；-25~-15°C Lagerung, 2 Jahre Gültigkeit (Einfrieren und Auftauen vermeiden).
Einheitendefinition
Die Menge an Enzym, die verwendet wurde, um den Absorptionswert von △A260 innerhalb von 30 Minuten bei 37 °C und einem pH-Wert von 8,0 um 1,0 zu ändern, was 37 μg Lachssperma-DNA durch Schneiden in Oligonukleotide entspricht, wurde als aktive Einheit (U) definiert.
Qualitätskontrolle
Restliches Wirtszellprotein: ELISA-Kit
•Protease Rückstände: 250 KU/ml UltraNuclease reagierte 60 Minuten lang mit dem Substrat, es wurde keine Aktivität festgestellt.
•Bakterielles Endotoxin: LAL-Test, Pharmakopöe der Volksrepublik China Band 4 (Ausgabe 2020) Gel-Limit-Testmethode.Allgemeine Regeln (1143).
•Keimbelastung: Arzneibuch der Volksrepublik China Band 4 (Ausgabe 2020) – Allgemein
Regeln für Sterilitätstests (1101), PRC National Standard, GB 4789.2-2016.
•Schwermetall:ICP-AES, HJ776-2015.
Betrieb
Die UltraNuclease-Aktivität wurde deutlich gehemmt, wenn die SDS-Konzentration über 0,1 % oder EDTA lag
Die Konzentration lag über 1 mM. Die Tenside Triton X-100, Tween 20 und Tween 80 hatten keinen Einfluss auf die Nuklease
Eigenschaften, wenn die Konzentration unter 1,5 % lag.
| Betrieb | Optimaler Betrieb | Gültiger Vorgang |
| Temperatur | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1- 15 mM |
| DTT | 0-100 mM | >100 mM |
| 2-Mercaptoethanol | 0-100 mM | >100 mM |
| Einwertiges Metallion (Na+, K+ usw.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Verwendung und Dosierung
• Entfernen Sie exogene Nukleinsäure aus Impfstoffprodukten, verringern Sie das Risiko einer verbleibenden Nukleinsäuretoxizität und verbessern Sie die Produktsicherheit.
• Reduzieren Sie die durch Nukleinsäure verursachte Viskosität der Futterflüssigkeit, verkürzen Sie die Verarbeitungszeit und erhöhen Sie die Proteinausbeute.
• Entfernen Sie die Nukleinsäure, die das Partikel umhüllt (Virus, Einschlusskörper usw.), was förderlich ist
zur Freisetzung und Reinigung des Partikels.
| Experimenteller Typ | Proteinproduktion | Virus, Impfstoff | Zellmedikamente |
| Zellenanzahl | 1g Zellfeuchtgewicht (resuspendiert mit 10 ml Puffer) | 1L Gärung flüssiger Überstand | 1L-Kultur |
| Mindestdosis | 250U | 100U | 100U |
| Empfohlene Dosierung | 2500U | 25000U | 5000U |
• Eine Nukleasebehandlung kann die Auflösung und Wiedergewinnung der Probe für Säulenchromatographie, Elektrophorese und Blot-Analyse verbessern.
• Bei der Gentherapie wird Nukleinsäure entfernt, um gereinigte Adeno-assoziierte Viren zu erhalten.
