BspQI
BspQI kann rekombinant in E. coli exprimiert werden, das bestimmte Stellen erkennen kann und unter produziert wird
BspQI, eine IIs-Restriktionsendonuklease, stammt von einem rekombinanten E. coli-Stamm, der das klonierte und modifizierte BspQI-Gen aus Bacillus sphaericus trägt.Es kann bestimmte Stellen erkennen und die Erkennungssequenz und Spaltstellen lauten wie folgt:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Produktmerkmale
1. Hohe Aktivität, schnelle Verdauung;
2. Geringe Sternaktivität, um ein präzises Schneiden wie beim „Skalpell“ sicherzustellen;
3. Ohne BSA und frei tierischen Ursprungs;
Methylierungsempfindlichkeit
Dbin Methylierung:Nicht empfindlich;
Dcm Methylierung:Nicht empfindlich;
CpG-Methylierung:Nicht empfindlich;
Lagerbedingungen
Das Produkt sollte bei ≤ 0℃ versendet werden;Bei -25 bis 15 °C lagern.
Speicherpuffer
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM Dithiothreitol, 500 µg/ml rekombinantes Albumin, 0,1 % Trition X-100 und 50 % Glycerin (pH 7,0 bei 25 °C).
Einheitendefinition
Eine Einheit ist definiert als die Enzymmenge, die erforderlich ist, um 1 µg interne Kontroll-DNA in 1 Stunde bei 50 °C in einem Gesamtreaktionsvolumen von 50 µl zu verdauen.
Qualitätskontrolle
Proteinreinheitstest (SDS-PAGE):Die Reinheit von BspQI betrug ≥95 %, bestimmt durch SDS-PAGE-Analyse.
RNase:10 U BspQI mit 1,6 μg MS2-RNA über 4 Stunden bei 50 °C führen zu keinem Abbau, wie durch Agarosegelelektrophorese bestimmt.
Unspezifische DNase-Aktivität:10 U BspQI mit 1 μg λ-DNA bei 50 °C für 16 Stunden, verglichen mit 50 °C für 1 Stunde, ergeben keine überschüssige DNA, wie durch Agarosegelelektrophorese bestimmt.
Ligatur und Nachschneiden:Nach dem Verdau von 1 μg λDNA mit 10 U BspQI können DNA-Fragmente mit T4-DNA-Ligase bei 16 °C ligiert werden.Und diese ligierten Fragmente können mit BspQI nachgeschnitten werden.
E coli DNA: Der E. coli 16s rDNA-spezifische TaqMan qPCR-Nachweis zeigte, dass E. coli-Genomreste ≤ 0,1 pg/ul waren.
Wirtsproteinrest:≤ 50 ppm
Bakterien Endotoxin: LAL-Test, gemäß der Ausgabe 2020 des Chinesischen Arzneibuchs IV, Gelgrenztestmethode, allgemeine Regel (1143).Der Gehalt an bakteriellem Endotoxin sollte ≤10 EU/mg betragen.
Reaktionssystem und Bedingungen
| Komponente | Volumen |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I-Puffer | 5 μL |
| dd H2O | Bis zu 50 μL |
Reaktionsbedingungen: 50℃, 1~ 16 Std.
Hitzeinaktivierung: 80 °C für 20 Minuten.
Das empfohlene Reaktionssystem und die empfohlenen Bedingungen können einen relativ guten Enzymverdauungseffekt erzielen, der nur als Referenz dient. Einzelheiten entnehmen Sie bitte den experimentellen Ergebnissen.
Produktanwendung
Restriktionsendonuklease-Verdau, schnelles Klonen.
Anmerkungen
1. Das Enzymvolumen ≤ 1/10 des Reaktionsvolumens.
2. Sternaktivität kann auftreten, wenn die Glycerinkonzentration mehr als 5 % beträgt.
3. Spaltungsaktivität kann auftreten, wenn das Substrat unter dem empfohlenen Verhältnis liegt.
