Bst 2.0 DNA-Polymerase (glycerinfrei)
Die Bst-DNA-Polymerase V2 stammt von der DNA-Polymerase I aus Bacillus stearothermophilus ab, die eine 5′→3′-DNA-Polymeraseaktivität und eine starke Kettenaustauschaktivität, aber keine 5′→3′-Exonukleaseaktivität aufweist.Bst DNA Polymerase V2 eignet sich ideal für Strangverdrängung, isotherme Amplifikation LAMP (Loop mediated isothermal amplification) und schnelle Sequenzierung.
Komponenten
| Komponente | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (glycerinfrei) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 Puffer | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Anwendungen
1.LAMP isotherme Verstärkung
2. DNA-Strang-Einzelverdrängungsreaktion
3. High-GC-Gensequenzierung
4.DNA-Sequenzierung im Nanogramm-Bereich.
Lagerbedingungen
Transport unter 0 °C und Lagerung bei -25 °C bis -15 °C.
Einheitendefinition
Eine Einheit ist definiert als die Enzymmenge, die 25 nmol dNTP in 30 Minuten bei 65 °C in säureunlösliches Material einbaut.
Qualitätskontrolle
1.Proteinreinheitstest (SDS-PAGE):Die Reinheit der Bst-DNA-Polymerase V2 beträgt ≥99 %, bestimmt durch SDS-PAGE-Analyse mittels Coomassie-Blue-Detektion.
2.Exonuklease-Aktivität:Die 16-stündige Inkubation einer 50-μL-Reaktion, die mindestens 8 U Bst-DNA-Polymerase V2 enthält, mit 1 μg λ-HindⅢ-verdauter DNA bei 37 °C führt zu keinem nachweisbaren Abbau.
3.Nickase-Aktivität:Die 16-stündige Inkubation einer 50-μL-Reaktion mit mindestens 8 U Bst-DNA-Polymerase V2 mit 1 μg pBR322-DNA bei 37 °C führt zu keinem nachweisbaren Abbau.
4.RNase-Aktivität:Die 16-stündige Inkubation einer 50-μL-Reaktion mit mindestens 8 U Bst-DNA-Polymerase V2 mit 1,6 μg MS2-RNA bei 37 °C führt zu keinem nachweisbaren Abbau.
5.E. coli-DNA:120 U Bst-DNA-Polymerase V2 werden mithilfe von TaqMan qPCR mit Primern, die für den E. coli-16S-rRNA-Locus spezifisch sind, auf das Vorhandensein genomischer DNA von E. coli untersucht.Die genomische DNA-Kontamination von E. coli beträgt ≤1 Kopie.
LAMP-Reaktion
| Komponenten | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Puffer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTPs (jeweils 10 mM) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Grün (25×)a | 1,0 μL |
| Grundierungsmischungb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (glycerinfrei) (8 U/uL) | 1 μL |
| Vorlage | × μL |
| ddH₂O | Bis zu 25 μL |
Anmerkungen:
1) a.SYTOTM 16 Grün (25×): Je nach experimentellem Bedarf können andere Farbstoffe als Ersatz verwendet werden;
2) b.Primermischung: erhalten durch Mischen von 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB und anderen Volumina.
Reaktion und Zustand
1 × HC Bst V2 Puffer, die Inkubationstemperatur liegt zwischen 60°C und 65°C.
Hitzeinaktivierung
80 °C, 20 Min
