Multiplex One Step RT-qPCR-Vormischung
Beschreibung
Kat.-Nr.: HCR5141A
Multiplex One Step RT-qPCR Premix ist ein quantitatives Multiplex-PCR-Kit, das auf RNA als Vorlage basiert.Im Experiment werden Reverse Transkription und quantitative PCR im selben Reaktionsgefäß durchgeführt, was den Versuchsablauf vereinfacht und das Risiko einer Kontamination verringert.Das einzigartige Design der Puffer- und Enzymmischung kann in einem einstufigen Lyophilisierungssystem verwendet werden.Das Kit nutzt hitzebeständige Reverse Transkriptase für die effiziente Synthese der Erststrang-cDNA unter Verwendung der Hotstart-Taq-DNA-Polymerase für die quantitative Amplifikation.Es enthält optimierte Reaktionspuffer, Enzymmischungen usw. sowie Faktoren, die die unspezifische PCR-Amplifikation wirksam hemmen und die Amplifikationseffizienz mehrerer qPCR-Reaktionen erhöhen. Dadurch wird eine mehrfache quantitative Fluoreszenzamplifikation ermöglicht und gleichzeitig die Amplifikationseffizienz der Primer sichergestellt.
Komponenten
| Name |
| 1. Lyo-Puffer |
| 2. Lyo-Enzym-Mischung |
| 3. Lyo-Schutzmittel |
TransportbedingungenIon
A: Lyo-Puffer und Schutzmittel: -25~-15℃, Haltbarkeit beträgt 1 Jahr.
B: Lyo-Enzym-Mischung, 2-8 ℃, Haltbarkeit beträgt 6 Monate.
Anleitung zur Bedienung
1. Reaktionssystem (nehmen Sie 25 μL als Beispiel)
| Komponenten | Volumen (μL) | Endgültige Konzentration |
| Lyo-Puffer | 6 | 1* |
| Lyo-Enzym-Mix | 1 | - |
| Lyo-Schutzmittel | 8 | - |
| Primermischung (10 μM) | 1 | 0,1–1 µM |
| Sondenmischung (10 μM) | 0,5 | 0,05–0,5 µM |
| RNA-Vorlage | 5 | - |
| DEPC H2O | Bis zu 25 | - |
2. Optimiertes Fahrradprotokoll
1) Standard-Fahrradprotokoll
| Reaktionsphase | Temperatur | Zeit | Zyklus | |
| 1 | Reverse Transkription | 50°Ca | 10 Minuten | 1 |
| 2 | Erstdenaturierung | 95°C | 5 Minuten | 1 |
| 3 | Verstärkungsreaktion | 95°C | 15 Sek | 45 Zyklen |
| 60°Cb | 30 Sekundenc |
2) Fast-Cycling-Protokoll
|
| Reaktionsphase | Temperatur | Zeit | Zyklus |
| 1 | Reverse Transkription | 50°Ca | 2 Minuten | 1 |
| 2 | Erstdenaturierung | 95°C | 2 Sek | 1 |
| 3 | Verstärkungsreaktion | 95°C | 1 Sek |
45 Zyklen |
| 60°Cb | 13 Sekc |
Notiz:
a) Umkehren Transkription: Die Temperatur kann 10–15 Minuten lang zwischen 42 °C und 50 °C liegen.
b) Verstärkungsreaktion: Die Temperatur wird entsprechend dem Tm-Wert der entworfenen Primer angepasst.
C)Fluoreszenz Signal Erwerb: Bitte stellen Sie den Versuchsablauf entsprechend den Anforderungen einInstrumentenhandbuch.
Technische Informationen/Spezifikationen
| Heißer Start | Eingebauter Heißstart |
| Erkennungsmethode | Primer-Sonden-Erkennung |
| PCR-Methode | Einstufige RT-qPCR |
| Art der Probe | RNA |
Anmerkungen
1. Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt.
2. Bitte tragen Sie die erforderliche PSA, wie Laborkittel und Handschuhe, um Ihre Gesundheit und Sicherheit zu gewährleisten！
