Alkalische Phosphatase (ALP)
Beschreibung
Alkalische Phosphatase wird von einem rekombinanten E. coli-Stamm abgeleitet, der das TAB5-Gen trägt.Das Enzym katalysiert die Dephosphorylierung der 5‘- und 3‘-Enden von DNA- und RNA-Phosphomonoestern.Außerdem hydrolysiert es Ribose sowie Desoxyribonukleosidtriphosphate (NTPs und dNTPs).TAB5 Alkalische Phosphatase wirkt auf 5‘ hervorstehende, 5‘ vertiefte und stumpfe Enden.Die Phosphatase kann in vielen molekularbiologischen Anwendungen eingesetzt werden, beispielsweise beim Klonen oder bei der Sondenendmarkierung, um die phosphorylierten Enden von DNA oder RNA zu entfernen.In Klonierungsexperimenten verhindert die Dephosphorylierung die Selbstligation der linearisierten Plasmid-DNA.Es kann auch nicht eingebaute dNTPs in PCR-Reaktionen abbauen, um eine Matrize für die DNA-Sequenzierung vorzubereiten.Das Enzym wird durch 5-minütiges Erhitzen auf 70 °C vollständig und irreversibel inaktiviert, wodurch die Entfernung der Phosphatase vor der Ligation oder Endmarkierung unnötig wird
Verwendung
1. An Proteine (Antikörper, Streptavidin usw.) gekoppelte alkalische Phosphatase kann Zielmoleküle spezifisch identifizieren und kann in ELISA, WB und histochemischem Nachweis verwendet werden;
2. Alkalische Phosphatase kann verwendet werden, um den 5'-Terminus von DNA oder RNA zu dephosphorisieren, um eine Selbstverknüpfung zu verhindern;
3. Die oben dephosphorylierte DNA oder RNA kann mit radioaktiv markierten Phosphaten markiert werden (über T4-Polynukleotidkinase).
Chemische Struktur
Spezifikation
| Probeartikel | Spezifikationen |
| Enzymaktivität | 5U/μL |
| Endonuklease-Aktivität | Nicht erkannt |
| Exonuklease-Aktivität | Nicht erkannt |
| Nicking-Aktivität | Nicht erkannt |
| RNase-Aktivität | Nicht erkannt |
| E. coli-DNA | ≤1Kopie/5U |
| Endotoxin | LAL-Test, ≤10EU/mg |
| Reinheit | ≥95 % |
Transport und Lagerung
Transport:Umgebungs
Lagerung :Bei 2-8°C lagern
Empfohlener erneuter TestLeben:2 Jahre
