Temperaturempfindliches UNG
Temperature Sensitive UNG (TS-UNG) wird durch rekombinante Expression in E. coli gewonnen.Das Enzym katalysiert die Freisetzung von freiem Uracil aus Uracil-haltiger einzel- und doppelsträngiger DNA und ist gegenüber RNA inaktiv.Im Vergleich zum herkömmlichen UNG-Enzym mit Ursprung im E. coli-Gen weist das TS-UNG-Enzym eine höhere Aktivität bei niedrigen Temperaturen (20℃~37℃) auf, ist temperaturempfindlich und lässt sich leicht inaktivieren (50℃), wodurch der Abbau der dUTP-haltigen Amplifikation vermieden wird Produkte bei Raumtemperatur durch die Restaktivität, die nach der Inaktivierung des herkömmlichen UNG-Enzyms verbleiben kann.Daher ist das TS-UNG-Enzym nicht nur für die PCR-Kontaminationspräventionsreaktion geeignet, sondern passt auch gut zum RT-PCR-Amplifikationsprogramm und kann in der RT-PCR-Kontaminationspräventionsreaktion verwendet werden.
Empfohlene Anwendung
Verstärkung der Kontaminationsprävention
Lagerbedingungen
-20 °C für Langzeitlagerung, vor Gebrauch gut mischen, häufiges Einfrieren und Auftauen vermeiden.
Speicherpuffer
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilisator, 50 % Glycerin.
Einheitendefinition
Die erforderliche Enzymmenge, um 1 µg einzelsträngige DNA mit dU-Basen in 1 Stunde bei 37 °C abzubauen, beträgt 1 Einheit Aktivität (U).
Qualitätskontrolle
1.SDS-PAGE-Elektrophorese-Reinheit größer als 98 %
2.Abbauaktivität, Chargenkontrolle, Stabilität
3.Keine exogene Nukleaseaktivität, keine exogene Endonuklease oder Exonukleasekontamination.
Anweisungen
| Komponenten | Volumen (μL) | Endgültige Konzentration |
| 10 × PCR-Puffer (dNTP-frei, Mg²).+frei) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (ersetzt dTTP) | - | 200–600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 HE (0,1–0,5 HE) |
| 25 × GrundierungsmischungA | 2 | 1× |
| Vorlage | - | <1μg/Reaktion |
| ddH₂O | Bis 50 | - |
Hinweis: a: Bei Verwendung für qPCR/qRT-PCR sollte die Fluoreszenzsonde dem Reaktionssystem hinzugefügt werden.Normalerweise kann eine Endkonzentration des Primers von 0,2 μM gute Ergebnisse liefern;Bei schlechter Reaktionsleistung kann die Primerkonzentration im Bereich von 0,2–1 μM eingestellt werden.Normalerweise wird die Sondenkonzentration im Bereich von 0,1–0,3 μM optimiert.Konzentrationsgradientenexperimente können durchgeführt werden, um die beste Kombination aus Primer und Sonde zu finden.
Anmerkungen
1.Die optimale Reaktionstemperatur des TS-UNG-Enzyms ist relativ niedrig und kann im Bereich von 20℃~37℃ optimiert werden, die Dosierung des Enzyms und die Reaktionszeit können im Bereich von 0,1~0,5 U, 5~ optimiert werden 10 Minuten;und das Enzym kann im Prozess der reversen Transkription inaktiviert werden.
2.Es ist für PCR und RT-PCR geeignet, um Kontaminationen zu verhindern.
3.Vermeiden Sie häufiges Einfrieren und Auftauen und setzen Sie es keinen großen Temperaturschwankungen aus.
4.Verschiedene zu amplifizierende Gene weisen eine unterschiedliche Nutzungseffizienz von dUTP und eine unterschiedliche Empfindlichkeit gegenüber dem UNG-Enzym auf. Wenn die Verwendung des UNG-Systems daher zu einer Verringerung der Nachweisempfindlichkeit führt, sollte das Reaktionssystem angepasst und optimiert werden. Wenn Sie technische Unterstützung benötigen, wenden Sie sich bitte an unser Unternehmen.
