2×HiF Taq plus Master Mix
Kat.-Nr.: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (mit Farbstoff) ist eine gebrauchsfertige 2x vorgemischte Lösung, die Plus HIF DNA Polymerase, dNTPs und optimierten Puffer enthält.Für eine einfache und hochspezifische Hot-Start-PCR werden dem Mastermix zwei monoklonale Antikörper bei Raumtemperatur hinzugefügt, die die Polymeraseaktivität und die 3′→5′-Exonukleaseaktivität hemmen.Der Erweiterungsfaktor wird dem Mastermix hinzugefügt, um dem Enzym eine lange Fragmentamplifikationskapazität zu verleihen. Die Länge der Amplifikation kann bis zu 13 kb betragen. Das Enzym verfügt über eine 5′→3′-DNA-Polymeraseaktivität und eine 3′→5′-DNA-Polymeraseaktivität. Die Genauigkeit der Exonuklease-Aktivität ist 83-mal so hoch wie die der Taq-DNA-Polymerase, was 9-mal so hoch ist wie die der gewöhnlichen DNA-Polymerase.Es eignet sich zur Amplifikation komplexer Templates, das Amplifikationsprodukt ist ein stumpfes Ende.
2×HIF Taq plus Master Mix (mit Farbstoff) bietet die Vorteile einer schnellen und einfachen Lösung, einer hohen Empfindlichkeit, einer starken Spezifität, einer guten Stabilität usw. Das Reaktionssystem muss nur Primer und Templates hinzufügen und kann durch eine zweifache Verstärkung verstärkt werden. Schrittprotokoll, das die experimentellen Schritte vereinfacht und Zeit spart.Dieses Produkt enthält Elektrophorese-Indikatorfarbstoffe und PCR-Produkte können direkt für die Elektrophorese verwendet werden.Darüber hinaus enthält das Produkt auch ein spezielles Schutzmittel, so dass die Mastermischung auch nach wiederholtem Einfrieren und Auftauen eine stabile Aktivität behält.
Lagerbedingungen
Produkte sollten 1 Jahr lang bei -25 bis -15 °C gelagert werden.
Spezifikationen
| Produktspezifikation | Master-Mix |
| Konzentration | 2× |
| Heißer Start | Integrierter Heißstart |
| Überhang | Unverblümt |
| Reaktionsgeschwindigkeit | Schnell |
| Größe (Endprodukt) | Bis zu 13 KB |
| Bedingungen für den Transport | Trockeneis |
| Produktart | High-Fidelity-PCR-Vormischungen |
Anweisungen
1.PCR-Reaktionssystem
| Komponenten | Volumen (μL) |
| DNA-Vorlage | Geeignet |
| Vorwärtsprimer (10 μmol/L) | 2.5 |
| Reverse Primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| ddH2O | bis 50 |
2.Empfohlene Verwendung verschiedener Vorlagen
| Art der Vorlage | Verstärken Sie Fragmente von 1 kb bis 10 kb |
| Genomische DNA | 50ng-200ng |
| Plasmid- oder Virus-DNA | 10pg-20ng |
| cDNA | 1–2,5 µL (10 % des endgültigen PCR-Reaktionsvolumens nicht überschreiten) |
3.Verstärkungsprotokoll
1) Zwei-Schritte-Protokoll (Komplexitätsvorlage)
| Zyklusschritt | Temp. | Zeit | Fahrräder |
| Erstdenaturierung | 98℃ | 3 Minuten | 1 |
| Denaturierung | 98℃ | 10 Sek | 30-35 |
| Verlängerung | 68℃ | 30 Sek./KB | |
| Endgültige Erweiterung | 72℃ | 5 Minuten | 1 |
2) Drei-Schritte-Protokoll (reguläres Protokoll)
| Zyklusschritt | Temp. | Zeit | Fahrräder |
| Erstdenaturierung | 98℃ | 3 Minuten | 1 |
| Denaturierung | 98℃ | 10 Sek | 30-35 |
| Glühen | 60℃ | 20 Sek | |
| Verlängerung | 72℃ | 30 Sek./KB | |
| Endgültige Erweiterung | 72℃ | 5 Minuten | 1 |
3) Annealing Gradient Protocol (Komplexitätsvorlage)
| Zyklusschritt | Temperatur | Zeit | Fahrräder |
| Erstdenaturierung | 98℃ | 3 Minuten | 1 |
| Denaturierung | 98℃ | 10 Sek | 15 (1℃ Reduzierung pro Zyklus) |
| Gradientenglühen | 70-55℃ | 20 Sek | |
| Verlängerung | 72℃ | 30 Sek./KB | |
| Denaturierung | 98℃ | 10 Sek |
20 |
| Glühen | 55℃ | 20 Sek | |
| Verlängerung | 72℃ | 30 Sek./KB | |
| Endgültige Erweiterung | 72℃ | 5 Minuten | 1 |
Funktionen unter verschiedenen Verstärkungsprotokollen
| Protokolll | Zwei Schritte | Dreistufig | Gradientenglühen |
| Spez. | schnell | Mittel | langsam |
| Spezifität | hoch | Mittel | hoch |
| PCR-Ausbeute | Mittel | hoch | Mittel |
| Erkennungsrate | hoch | Mittel | hoch |
Anmerkungen
Bitte tragen Sie die erforderliche PSA, wie Laborkittel und Handschuhe, um Ihre Gesundheit und Sicherheit zu gewährleisten!
