UDG/UNG-Enzyme
UDG (Uracil-DNA-Glykosylase) kann die Hydrolyse der N-glykosidischen Bindung zwischen der Uracil-Base und dem Zucker-Phosphat-Rückgrat in ssDNA und dsDNA katalysieren.Es kann die Aerosolverschmutzung leicht kontrollieren und ist für gängige molekularbiologische Systeme wie PCR, qPCR, RT-qPCR und LAMP geeignet.
Spezifikationen
| Ausdruckshost | Rekombinanter E. coli mit Uracil-DNA-Glycosylase-Gen |
| Molekulargewicht | 24,8 kDa |
| Reinheit | ≥95 % (SDS-SEITE) |
| Hitzeinaktivierung | 95℃, 5~10 Min |
| Einheitendefinition | Eine Einheit (U) ist definiert als die Enzymmenge, die erforderlich ist, um die Hydrolyse von 1 μg dU-haltiger dsDNA in 30 Minuten bei 25 °C zu katalysieren. |
Lagerung
Das Produkt sollte zwei Jahre lang bei -25℃~-15°C gelagert werden.
Anweisungen
1.Herstellung der PCR-Reaktionsmischung nach folgendem System
| Komponenten | Volumen (μL) | Endgültige Konzentration |
| 10×PCR-Puffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/Lauge) | 1 | 0,2 mmol/Lauge |
| Template-DNA | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq-DNA-Polymerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0,05 U/μL |
| Uracil-DNA-Glykosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Bis zu 50 | - |
Notiz: Entsprechend den experimentellen Anforderungen kann die Endkonzentration von dUTP zwischen 0,2 und 0,6 mmol/L eingestellt und 0,2 mmol/L dTTP selektiv zugegeben werden.
2.Verstärkungsverfahren
| Zyklusschritt | Temperatur | Zeit | Fahrräder |
| dU-haltiger Templatabbau | 25℃ | 10 Minuten | 1 |
| UDG-Aktivierung, anfängliche Denaturierung der Vorlage | 95℃ | 5~10 Min | 1 |
| Denaturierung | 95℃ | 10 Sek |
30-35 |
| Glühen | 60℃ | 20 Sek | |
| Verlängerung | 72℃ | 30 Sek./KB | |
| Endgültige Erweiterung | 72℃ | 5 Minuten | 1 |
Notiz: Die Reaktionszeit bei 25 °C kann entsprechend den experimentellen Anforderungen innerhalb von 5–10 Minuten angepasst werden.
Anmerkungen
1.UDG ist in den meisten PCR-Reaktionspuffern aktiv.
2.Enzyme sollten bei Verwendung in einem Eisschrank oder auf einem Eisbad gelagert werden und unmittelbar nach der Verwendung bei -20 °C gelagert werden.
3.Bitte tragen Sie die erforderliche PSA, wie Laborkittel und Handschuhe, um Ihre Gesundheit und Sicherheit zu gewährleisten!
