Rnase-Inhibitor (frei von Glycerin)
Muriner RNase-Inhibitor ist ein rekombinanter muriner RNase-Inhibitor, der aus E. coli exprimiert und gereinigt wird.Es bindet durch nichtkovalente Bindung im Verhältnis 1:1 an RNase A, B oder C, hemmt dadurch die Aktivität der drei Enzyme und schützt die RNA vor dem Abbau.Es ist jedoch nicht wirksam gegen RNase 1, RNase T1, S1-Nuklease, RNase H oder RNase aus Aspergillus.Der murine RNase-Inhibitor wurde mittels RT-PCR, RT-qPCR und IVT-mRNA getestet und war mit verschiedenen kommerziellen Reverse-Transkriptasen, DNA-Polymerasen und RNA-Polymerasen kompatibel.
Im Vergleich zu menschlichen RNase-Inhibitoren enthält muriner RNase-Inhibitor keine zwei Cysteine, die sehr empfindlich auf Oxidation reagieren, was zur Inaktivierung des Inhibitors führt.Dadurch ist es bei niedrigen DTT-Konzentrationen (weniger als 1 mM) stabil.Aufgrund dieser Funktion eignet es sich für den Einsatz bei Reaktionen, bei denen hohe DTT-Konzentrationen die Reaktion beeinträchtigen (z. B. Echtzeit-RT-PCR).
AAnwendung
Dieses Produkt kann in jedem Experiment eingesetzt werden, bei dem eine RNase-Interferenz zur Vermeidung des RNA-Abbaus möglich ist, wie zum Beispiel:
1. Erststrang-cDNA-Synthese, RT-PCR, RT-qPCR usw.;
2. RNA vor Abbau bei der In-vitro-Transkription/-Translation schützen (z. B. virale Replikation in vitro);
3. Hemmung der RNase-Aktivität während der RNA-Isolierung und -Reinigung.
Lagerbedingungen
Bei -25 bis 15 °C lagern;
Frost-Tau-Zyklen ≤ 5 Mal;
Gültig für 1 Jahr.
Einheitendefinition
Eine Einheit ist definiert als die Menge an RNase-Inhibitor, die erforderlich ist, um die Aktivität von 5 ng RNase A um 50 % zu hemmen.
Molekulargewicht
RNase-Inhibitor (glycerinfrei) ist ein 50 kDa-Protein.
Qualitätskontrolle
Exonuklease Aktivität:
Die 16-stündige Inkubation von 40 U Enzym mit 1 μg λ-Hind III-verdauter DNA bei 37 °C führte laut Gelelektrophorese zu keinem nachweisbaren Abbau der DNA.
Endonukleaseaktivität:
Die 16-stündige Inkubation von 40 U Enzym mit 1 μg λ-DNA bei 37 °C führte laut Gelelektrophorese zu keinem nachweisbaren Abbau der DNA.
Nicken Aktivität:
Die 16-stündige Inkubation von 40 U Enzym mit 1 μg pBR322 bei 37 °C führte laut Gelelektrophorese zu keinem nachweisbaren Abbau der DNA.
RNase Aktivität:
Die 4-stündige Inkubation von 40 U Enzym mit 1,6 μg MS2-RNA bei 37 °C führte laut Gelelektrophorese zu keinem nachweisbaren Abbau der RNA.
E.Coli-DNA:
40 U Enzym werden durch TaqMan qPCR nachgewiesen.Die E. coli-DNA beträgt ≤ 0,1 pg/40 U.
NAnmerkungs
1. Nicht heftig schütteln oder rühren, um eine Inaktivierung des Enzyms zu verhindern.
2.RNase-Inhibitor ist bei Temperaturen von 25℃ bis 55℃ aktiv und wird bei ≥65℃ inaktiviert.
3. Die Aktivität von RNase H, RNase 1 und RNase T1 wird nicht gehemmt.
4. Der pH-Bereich zur Hemmung der RNase-Aktivität ist breit (aktiv bei pH 5–9) und zeigt die maximale Aktivität bei pH 7–8.
