DNase I (Rnase-frei) (5 U/ul)
Kat.-Nr.: HC4007A
DNase I (Desoxyribonuklease I) ist eine Endodeoxyribonuklease, die einzel- oder doppelsträngige DNA verdauen kann.Es erkennt und spaltet Phosphodiesterbindungen, um Monodesoxynukleotide oder einzel- oder doppelsträngige Oligodesoxynukleotide mit Phosphatgruppen am 5'-Terminus und Hydroxylgruppen am 3'-Terminal zu erzeugen.Die Aktivität von DNase I hängt von Ca ab2+und kann durch zweiwertige Metallionen wie Mn aktiviert werden2+und Zn2+.5 mM Ca2+schützt das Enzym vor Hydrolyse.In Anwesenheit von Mg2+, könnte das Enzym jede Stelle auf jedem DNA-Strang zufällig erkennen und spalten.In Anwesenheit von Mn2+, können die Doppelstränge der DNA gleichzeitig erkannt und an fast derselben Stelle gespalten werden, um DNA-Fragmente mit flachem Ende oder DNA-Fragmente mit klebrigem Ende mit 1–2 hervorstehenden Nukleotiden zu bilden.
Komponenten
| Name | 0,1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNase-frei | 20μL | 200μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I-Puffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Lagerbedingungen
-25℃~-15℃ für die Lagerung;Transport unter Eisbeuteln.
Anweisungen
1. Bereiten Sie die Reaktionslösung im RNase-freien Röhrchen gemäß den unten aufgeführten Anteilen vor:
| Komponente | Volumen |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I-Puffer | 1μL |
| DNase I, RNase-frei (5U/μL) | 1 U pro µg RNA① |
| ddH2O | Bis zu 10 μL |
Hinweis: ①Berechnen Sie das Volumen an DNase I, das basierend auf der RNA-Menge hinzugefügt werden muss.
2. 37 ℃ für 15 Minuten;
3. Fügen Sie 0,5 M EDTA bis zur Endkonzentration von 2,5 mM bis 5 mM hinzu und erhitzen Sie es 10 Minuten lang auf 65 °C, um die Reaktion zu stoppen.Die Probe kann direkt für die nächste Reaktion, beispielsweise die reverse Transkription, verwendet werdenExperiment.
Einheitendefinition
Eine Einheit ist als die Enzymmenge definiert, die 1 µg pBR322 vollständig abbautDNA in 10 Minuten bei 37℃.
Qualitätskontrolle
RNase:5 U DNase I mit 1,6 µg MS2-RNA für 4 Stunden bei 37 °C führen zu keinem Abbaubestimmt durch Agarosegelelektrophorese.
Anmerkungen
1. Bitte bereiten Sie 0,5 MEDTA selbst vor.
2. Verwenden Sie 1U DNase I pro µg RNA.Wenn die RNA jedoch weniger als 1 µg beträgt, verwenden Sie bitte 1U DNase I.
3. Bitte legen Sie das Enzym während des Betriebs auf Eis.
