One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Kat.-Nr.: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix dient zur Fluoreszenzquantifizierung auf Basis des SYBR Green I-Farbstoffs.Durch die Verwendung genspezifischer Primer werden Reverse Transkription und qPCR-Reaktionen in einem Röhrchen durchgeführt, sodass kein wiederholtes Öffnen des Deckels und Pipettieren erforderlich ist, was die Effizienz des Assays erheblich verbessert und das Risiko einer Kontamination verringert.Für RNA-Proben verwendet das Kit hitzebeständige Reverse Transkriptase für eine effiziente cDNA-Synthese und HotStart Taq DNA-Polymerase für die quantitative Amplifikation.Unter dem optimierten Puffersystem kann die Empfindlichkeit des Kits bei stark exprimierten Zielen bis zu 0,1 pg und bei mäßig exprimierten Zielen bis zu 1 pg betragen.Das Kit eignet sich zur Amplifikation und Quantifizierung von DNA-Proben.Es ermöglicht den empfindlichen Nachweis und die Quantifizierung von Nukleinsäuren aus verschiedenen pflanzlichen und tierischen Proben, Zellen und Mikroorganismen.
Komponenten
| No | Name | Volumen | Volumen |
| 1 | Erweiterter Puffer | 250 μL | 2×1,25 ml |
| 2 | Fortschrittlicher Enzymmix | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase-freies H2O | 250 μL | 2×1,25 ml |
Lagerbedingungen
Dieses Produkt sollte 1 Jahr lang bei -25 bis -15 °C lichtgeschützt gelagert werden.
Anweisungen
1. Konfiguration des Reaktionssystemsd
| Komponenten | Volumen (μL) | Volumen (μL) | Endgültige Konzentration |
| Erweiterter Puffer | 12.5 | 25 | 1× |
| Fortschrittlicher Enzymmix | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Reverse Primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| RNA-Tamplateb | X | X | - |
| RNase-freies H2Öc | bis 25 | bis 50 | - |
Anmerkungen:
1) a.TDie endgültige Primerkonzentration betrug 0,2 μmol/L, die je nach Bedarf auch zwischen 0,1 und 1 μmol/L angepasst werden konnte.
2) b.Das Reagenz ist äußerst empfindlich, mit einer Gesamt-RNA im Bereich von 1 pg–1 μg, und Tests an menschlichen Proben zeigten eine optimale Eingabe von 1 pg–100 ng, wobei ein Gesamt-Ct-Wert im Bereich von 15–30 kontrolliert wurde.
3) c.Es wird empfohlen, 20 μl oder 50 μl zu verwenden, um die Gültigkeit und Reproduzierbarkeit der Zielgenamplifikation sicherzustellen.
4) d.Bitte bereiten Sie die Proben in der Ultra-Clean-Bank vor und verwenden Sie nukleaserückstandsfreie Spitzen und Reaktionsröhrchen.Empfehlenswert sind Spitzen mit Filterkartuschen.Vermeiden Sie Kreuzkontaminationen und Aerosolkontaminationen.
2.Reaktionsprogramm
| Zyklusschritt | Temp. | Zeit | Fahrräder |
| Reverse Transkription | 50℃a | 6 Min | 1 |
| Erstdenaturierung | 95℃ | 5 Minuten | 1 |
| Verstärkungsreaktion | 95℃ | 15 Sek | 40 |
| 60℃b | 30 Sekunden | ||
| Schmelzkurvenstadium | Gerätestandards | 1 | |
Anmerkungen:
1) a.Die Reverse-Transkriptionstemperatur kann je nach experimentellen Anforderungen zwischen 50 und 55 °C gewählt werden.Bei DNA-Proben kann auf den Reverse-Transkriptionsprozess verzichtet werden.
2) b.In besonderen Fällen kann die Glüh-/Verlängerungstemperatur entsprechend dem Tm-Wert des Primers angepasst werden, 60 °C werden empfohlen.
Anmerkungen
1. Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt.
2. Bitte tragen Sie zu Ihrer Sicherheit Laborkittel und Einweghandschuhe.
