Rnase A
Ribonuklease A (RNaseA) ist ein einzelsträngiges Polypeptid mit 4 Disulfidbindungen und einem Molekulargewicht von etwa 13,7 kDa.RNase A ist eine Endoribonuklease, die einzelsträngige RNA spezifisch an C- und U-Resten abbaut.Konkret erkennt die Spaltung die Phosphodiesterbindung, die durch die 5'-Ribose eines Nukleotids und die Phosphatgruppe an der 3'-Ribose des benachbarten Pyrimidinnukleotids gebildet wird, sodass die 2,3'-zyklischen Phosphate zu den entsprechenden 3 hydrolysiert werden 'Nukleosidphosphate (z. B. pG-pG-pC-pA-pG werden durch RNase A gespalten, um pG-pG-pCp und A-PG zu erzeugen).RNase A ist am aktivsten bei der Spaltung einzelsträngiger RNA.Die empfohlene Arbeitskonzentration beträgt 1–100 μG/ml und ist mit verschiedenen Reaktionssystemen kompatibel.Eine niedrige Salzkonzentration (0–100 mM NaCl) kann zum Schneiden von einzelsträngiger RNA, doppelsträngiger RNA und durch RNA-DNA-Hybridisierung gebildeten RNA-Ketten verwendet werden.
Bei einer hohen Salzkonzentration (≥0,3 M) spaltet RNase A jedoch nur spezifisch einzelsträngige RNA.
RNase A wird am häufigsten zur Entfernung von RNA bei der Herstellung von Plasmid-DNA oder genomischer DNA verwendet.Ob DNase während des Herstellungsprozesses aktiv ist oder nicht, kann die Reaktion leicht beeinflussen.Die traditionelle Methode des Kochens in einem Wasserbad kann zur Inaktivierung der DNase-Aktivität verwendet werden.Dieses Produkt enthält keine DNase und Protease und erfordert vor der Verwendung keine Wärmebehandlung.Darüber hinaus kann dieses Produkt auch in molekularbiologischen Experimenten wie der RNase-Schutzanalyse und der RNA-Sequenzanalyse eingesetzt werden.
Lagerbedingungen
Das Produkt sollte 2 Jahre lang bei -25℃~-15℃ gelagert werden.
Spezifikationen
| Aussehen | Pulver |
| Menge | 100 mg / 1 g |
| Produktart | RNase A |
Anweisungen
Dies ist eine der gängigen Methoden zur Vorbereitung der RNase A-Aufbewahrungslösung.Es kann auch zubereitet werdendurch andere Methoden gemäß den traditionellen Methoden im Labor oder in der Referenzliteratur (z. Bdirektes Auflösen in 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 oder Tris-NaCl-Lösung)
1. Verwenden Sie 10 mM Natriumacetat (pH 5,2), um 10 mg/ml RNase A-Aufbewahrungslösung herzustellen.
2. Erhitzen auf 100 °C für 15 Minuten.
3. Auf Raumtemperatur abkühlen lassen, 1/10 Volumen 1 M Tris-HCl (pH 7,4) hinzufügen und den pH-Wert auf 7,4 einstellen (zFügen Sie beispielsweise 500 ml 10 mg/ml RNase-Aufbewahrungslösung (1 M Tris-HCl, pH 7,4) hinzu.
4. Unterverpackt bei -20℃ für die Tiefkühllagerung, die bis zu 2 Jahre stabil sein kann.
[Anmerkungen]:
Beim Kochen einer RNaseA-Lösung unter neutralen Bedingungen bildet sich ein RNase-Niederschlag;Wenn Sie es bei einem niedrigeren pH-Wert kochen, kann es zu Ausfällungen kommen, die durch das Vorhandensein von Proteinverunreinigungen verursacht werden können.Wenn nach dem Kochen Sedimente gefunden werden, können Verunreinigungen durch Hochgeschwindigkeitszentrifugation (13.000 U/min) entfernt und dann zur Gefrierlagerung verpackt werden.
Anmerkungen
Bitte tragen Sie die erforderliche PSA, wie Laborkittel und Handschuhe, um Ihre Gesundheit und Sicherheit zu gewährleisten.
